Ботулизм лабораторная диагностика

Клостридии ботулизма и ботулизм

Клостридии ботулизма

С. botulinum — возбудитель ботулизма, впервые описан Э. Ван Эрменгемом в 1896 г.

Морфология и физиология

Бактерии разного размера с перитрихиально расположенными жгутиками. Образует споры, которые придают бактериальной клетке вид теннисной ракетки. Выраженной капсулы не имеют. Размножаются на глюкозо-кровяном агаре, образуя небольшие прозрачные колонии с ровными или изрезанными краями, окруженные зоной гемолиза. На жидких средах наблюдается равномерное помутнение и осадок. Сахаролитические свойства непостоянны и не используются для идентификации этих бактерий. По протеолитическим свойствам не однородны. Протеолитические штаммы гидролизуют казеин и образуют H2S.

Антигены

Вид C.botulinum неоднороден по антигенной специфичности образуемых токсинов. Последние подразделяются на 7 сероваров: А, В, С и т.д. Изучение антигенной структуры бактериальных клеток в связи с особенностями патогенеза ботулизма при идентификации возбудителя не проводится.

Патогенность и патогенез

Патогенность клостридии ботулизма связана с его токсином, являющимся самым сильным ядом, 1 мкг которого может убить взрослого человека. Экзотоксин является нейротоксином. Как и многие другие экзотоксины состоит из двух субъединиц, одна из которых отвечает за адсорбцию на рецепторах чувствительных клеток — нейронов, другая — за проникновение в них путем эндоцитоза и развитие последующих событий. Последние заключаются в ингибиции Са-зависимого освобождения ацетилхолина, вследствие чего блокируется передача нервного импульса через синапсы. Это приводит к поражению бульбарных нервных центров, нарушению походки, зрения, асфиксии и другим явлениям. Летальные исходы до 60%. Образование ботулотоксина контролируется про-фагом при лизогенизации данных бактерий и генами C.botulinum. При попадании клостридии в рану может возникнуть ботулизм ран. При этом вегетативные клетки продуцируют нейротоксин, вызывая картину пищевой интоксикации. У детей 3-8 мес. жизни ботулизм возникает в результате проникновения клостридии при родах через пупочный канатик. Болезнь протекает вяло вследствие поступления в организм малого количества токсина. Является причиной внезапной детской смертности.

Иммунитет

Постинфекционный иммунитет отсутствует. Это связано со слабыми иммуногенными свойствами ботулинистического экзотоксина.Экология и эпидемиология. Естественной средой обитания С. botulinum является кишечник многих преимущественно травоядных животных, а также рыб, ракообразных, моллюсков, в котором они размножаются и выделяются с фекалиями в окружающую среду. Споры клостридии ботулизма в значительном количестве встречаются в почве, воде, иле. Они резистентны к высокой температуре, и выдерживают кипячение в течение 1-5 ч. Заражение происходит алиментарным путем. Причиной отравления является употребление рыбных, овощных, мясных консервов и других пищевых продуктов, в частности консервированных в домашних условиях.

Ботулизм

Ботулизм — тяжелое, часто фатальное токсикоинфекция, которая возникает вследствие употребления продуктов, содержащих токсины Clostridium botulinum, сопровождается специфическими поражениями нервной системы, преимущественно ядер языково-гортанных и окуломоторного нервов. Иногда болезнь развивается после инфицирования ран клостридиями ботулизма.С botulinum продуцирует 8 типов сильных токсинов: А, В, С,, С2, D, Е, F, G, отличающиеся антигенной специфичностью, что необходимо учитывать при проведении лабораторной диагностики и лечении. Ботулизм у людей вызывают типа А, В, Е и F, типа С и D — у млекопитающих и птиц. Патогенность типа G для человека и животных не доказана.Основным резервуаром и источником инфекции в природе теплокровные травоядные животные, в кишечнике которых клостридии размножаются и с фекалиями в большом количестве попадают в почву и воду.Заболевание возникает при потреблении в пищу мясных, рыбных и других, преимущественно консервированных продуктов, в которых накапливаются клостридии ботулизма и их токсины. Опасными являются консервированные продукте домашнего приготовления, особенно грибы.Лабораторная диагностика ботулизма направлена на выявление токсина в материалах, взятых у больных, а также пищевых продуктах, повлекших отравление. Токсин определяют путем постановки биопробы и установления его типа в реакции нейтрализации. Значительно реже выделяют чистую культуру возбудителя и проводят серологические исследования.

Взятие материала

Во всех случаях заболеваний с симптомами ботулизма у больных обязательно принимают промывные воды желудка, рвотные массы, кровь, фекалии, мочу, от трупа — содержимое желудка и кишок, лимфатические узлы, кусочки печени, головного и спинного мозга. Необходимо исследовать и остатки подозрительной пищи.Кровь у больного в количестве 10 мл берут до введения ботулиновым лечебных сывороток в пробирку с лимоннокислого натрия в соотношении 3:1. Промывные воды желудка, рвотные массы (100-200 мл) и стул (50-60 г) помещают в стеклянные банки с резиновыми пробками. Консервирующие вещества добавлять нельзя. При взятии секционного материала 50-60 г каждого органа помещают в отдельную банку. Остатки пищи отбирают по 200-300 г.Плотные материалы вначале растирают в ступках, вносят двойной объем изотонического или желатино-фосфатного раствора и оставляют при комнатной температуре на 2 часа для извлечения токсина. Экстракт центрифугируют, жидкость над осадком используют для поставки биологической пробы. Кровь вводят без какой-либо обработки.Пробы, доставлены в лаборатории, исследуют одновременно в двух направлениях: 1) для выявления ботулотоксина, 2) с целью выделения С. botulinum. Одновременно в тех же пробах вияляють и С. perfringens.

Выявление ботулиновым токсинов

Наличие ботулинового токсина в исследуемом материале и определение его типа проводят с помощью реакции нейтрализации на белых мышах. Для этого отбирают 5 пар мышей весом 16-18 г на каждую пробу. В реакции используют диагностические (неликувальни!) антитоксические ботулином сыворотки типов А, В, Е, F, которые разводят 0,85% раствором хлорида натрия до 100-200 МЕ / мл, что обеспечивает нейтрализацию гомологического токсина в исследуемой пробе.Центрифугат доставленных материалов или кровь больного разливают по 1,4 мл в 5 пробирок. В первые четыре из них вносят по 0,6 мл (200 МЕ / мл) антитоксических протиботулинових сывороток соответственно типов А, В, Е и F. В последнюю пробирку добавляют 0,6 мл нормальной сыворотки. Все пробирки выдерживают 40 мин при комнатной температуре для нейтрализации токсина. По 1-му мл смеси из каждой пробирки вводят пяти парам мышей (центрифугат + сыворотки — подкожно, кровь + сыворотки — в брюшную полость). За животными наблюдают в течение 3-4-х дней.При наличии в исследуемом материале ботулинового токсина погибают четыре пары мышей, кроме двух, которым была введена смесь материала с тем типом сыворотки, нейтрализовала действие гомологического типа токсина При гибели всех мышей пробу следует повторить с разведенным в 10, 20, 100 раз биологическим материалом.Постановка реакции нейтрализации с определением типа ботулотоксина имеет важное значение при выборе соответствующей сыворотки для специфического лечения ботулизма. Поэтому при выдаче ответа об обнаружении ботулинового токсина лаборатория должна обязательно указывать его тип.Если бактериологическая лаборатория имеет типичные антитоксические ботулином эритроцитарные диагностикумы, серотип токсина лучше определять с помощью реакции непрямой гемагглютинации. Она высокоспецифические, чувствительная, значительно экономичнее, быстрее дает результат, чем реакция нейтрализации in vivo. Для выявления возбудителя ботулизма или его токсина можно применять метод ИФА и имуноелектрофорезу.Профессор С.М. Минервин и его сотрудники в 1959 г. разработали ускоренный метод диагностики ботулизма посредством определения фагоцитарного показателя. Он основывается на том, что ботулотоксина резко подавляют фагоцитарную функцию лейкоцитов. Гомологичная антитоксическое ботулиновым сыворотка нейтрализует лейкотоксичну действие экзотоксина, чего нет при действии гетерологичных сывороток.Опыт ставят с использованием микродоз компонентов. В 5 маленьких пробирок вносят пипеткой Панченкова по одному объема лимоннокислого натрия (V4 делений пипетки до метки 75) и по два объема крови больного. Затем в пробирку № 1 добавляют один объем 0,85% раствора хлорида натрия, а в пробирки № 2, С, 4 и 5 — соответствующие диагностические ботулином сыворотки типов А, В, Е, F в том же объеме. После перемешивания всех компонентов пробирки ставят в термостат на 30 мин для нейтрализации возможного токсина в крови больного гомологичной сывороткой и во все пробирки вносят по одному объема 1 млрд взвеси культуры золотистого стафилококка и снова помещают в термостат на 20 мин для завершения процесса фагоцитоза. С содержимого каждой пробирки готовят мазки, окрашивают по Романовскому-Гимзе и определяют фагоцитарный показатель. Для этого подсчитывают количество поглощенных кокков в 50 полинуклерах и делят полученное число на 50. Если в крови больного является токсин, то фагоцитарные показатели во всех пробах крови будут низкие, за исключением показателя в той пробирке, где тип токсина и сыворотки гомологичны. В тяжелых случаях ботулизма фагоцитарный показатель может падать до нуля. Гомологичная сыворотка, нейтрализуя токсин, восстанавливает этот показатель до нормы. Метод нельзя использовать для обнаружения ботулотоксина в пищевых продуктах и секционном материале.

Выделение культур С. botulinum

К посеву исследуемый материал эмульгируют в фарфоровую ступку как выше указано. По 10 мл материала сеют в 4 флакона с 75-150 мл свижорегенерованого жидкой среды (Китт-Тароцци, Хоттингера, казеиново-грибного). Два флакона прогревают: один при 60 ° С в течение 15 мин (для селекции С. botulinum типа Е), второй — 20 мин при 80 ° С. Два флакона инкубируют при 28 ° С (для типов Е и F) остальные — при 35 ° С в анаеростати или под слоем вазелинового масла толщиной 0,5 см. На 2, 4, 6 и 10-й день с флаконов, где есть рост , изготовляют мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Возбудитель ботулизма имеет вид крупных грамположительных палочек с овальной субтерминальною спорой, напоминающие теннисные ракетки.Чтобы определить тип ботулотоксина из флакона отбирают 10-15 мл культуральной жидкости, центрифугируют ее и ставят реакцию нейтрализации на белых мышах или РНГА с типичными ботулиновым сыворотками, как выше описано.Для получения изолированных колоний с целью выделения чистой культуры каплю культуральной жидкости из флакона вносят на поверхность анаэробного кровяного или печеночного агара и втирают стеклянной шпателем в агар последовательно в трех чашках. Посевы выращивают в анаеростатах. Через 48 ч инкубации изучают характер колоний. На кровяном агаре колонии могут быть неправильной формы с фестончатыми краями, или гладкие, круглые, с зонами гемолиза вокруг них. Различные типы С. botulinum могут образовывать неодинаковы колонии. При посеве уколом в высокий столбик сахарного агара колонии имеют вид чечевичок или жмуточкив ваты.После микроскопирования типичных колоний их отсеивают на среду Китт-Тароцци, получают чистую культуру и идентифицируют ее по морфологическим, культуральным, токсигенными и биохимическими свойствами путем посева в среде Гисса. Палочки ботулизма ферментируют глюкозу, галактозу, глицерин, мальтозу, сахарозу, фруктозу до кислоты и газа, разжижают желатин, выделяют H2S, не образуют индол. Для дифференциации С botulinum от других анаэробов используют и другие тесты.Определение сероваров возбудителя ботулизма осуществляют с помощью реакции нейтрализации токсина in vivo, методом ИФА или в РНГА.Методика выделения С. perfingens при пищевых отравлениях изложена в разделе анаэробной газовой инфекции.

Профилактика и лечение

Вакцинопрофилактика не проводится. Для лечения используют противоботулиническую поливалентную сыворотку, поскольку антитела к одному серовару токсина не нейтрализуют другие серовары. Эту сыворотку вводят и с целью поздней профилактики лицам, подозреваемым в употреблении зараженных продуктов.

Разработка экспресс-методов диагностики ботулизма тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат биологических наук Мустафин, Тимур Рустемович

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Мустафин, Тимур Рустемович, 2014 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Авакян, А. О. Материалы 6 Всесоюзной конференции по вопросам санитарной микробиологии / А.О. Авакян // М. -1966. — С. 78.

6. Бондарев, Л.С. Ботулизм / Л. С. Бондарев, Ю. С. Варенко // Киев: Здоровье. -1990. — 72 с.

7. Бочарова, Н. Г. Новая тест система обнаружения специфических антител / Н. Г. Бочарова// Сб. науч. трудов. — 1979. — Вып. 4. — С. 157-161.

8. Бусыгин, К. Ф. Люминесцентная диагностика инфекционных болезней животных / К. Ф. Бусыгин. — М.: Колос, 1975.-160 с.

9. Булатова, Т. И. Журн. микробиологии / Т. Н. Булатова, У. А. Кабанова // — 1960.-№3.-С. 18.

11. Булатова, Т. И. Журн. микробиологии / Т. И. Булатова // 1964. — № 1. — С. 96; 1964.-№7.-С. 79.

12. Булатова, Т. И. Ботулизм и его профилактика./ Т. Н. Булатова // Ме-тод.указания. — М.:Медгиз. — 1966. — 37 с.

16.Бургасов, П. Н. Эволюция клостридиозов / П. Н. Бургасов, С. Н. Румянцев // М.: Медицина. — 1974. — С. 12.

17.Берман, В. М. Курс частной эпидемиологии / В. М. Берман, A.M. Левитов. -Изд. 3-е исправл. М.: Наркомздрав СССР. Медгиз, 1944 .-440 с.

18.Вертиев, Ю. В. / Ю. В. Вертиев // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1999. — № 5. — С. 40 — 47.

(К99,А20) для локальной защиты и иммунотерапии смешанных форм диареи новорожденных телят/ // Патент на изобретение РФ №2145504. 2000.

24. Громашевский, Л. В. Механизм передачи инфекции / Л. В. Громашевский. -Киев: Госмедиздат, 1958.-332 с.

25. Далин, М. В. Белковые токсины микробов / М. В. Далин, Н. Г. Фиш. -М.: Медицина, 1980.-224 с.

26. Дербин, М. И. Ботулизм / М. И. Дербин // ВПБЗН — 1983.- Вып. 31. — С. 245 -252.

29. Донец, Ю. И. Тезисы докладов научной сессии Одесского мед. ин-та им. Пи-рогова / Ю. И. Донец // 1956. — С. 27.

30. Егоров, А. М. Успехи биоорганического катализа / А. М. Егоров, Б. Б. Дзантиев, Е. М. Гаврилова // МГУ. М. — 1979. — С. 239.

31. Зубко, Л. А. Труды Одесского медецинского Института / Л. А. Зубко // Одесса. — 1959. — Вып. 9.-С. 68.

32. Зуева, Л. П. Эпидемиология / Л. П.Зуева, Р. X. Яфаев. — Санкт — Петербург: Фолиант, 2006. -752 с.

33.Иванов, А. В. Радиовакцины: проблемы и перспективы / А. В. Иванов, Р.Н. Низамов, Г.В. Конюхов. — Изд.: КГУ, 2008.- 498 с.

34. Иванова, М. А. Ботулизм : учеб.-метод, пособие / М. А. Иванова. — Минск: БГМУ, 2009.-24 с.

35. Иванов, Н. Р. Вопросы патогенеза ботулизма / Н. Р. Иванов, Н. Р. Чеснокова, А. В. Архангельский. — Саратов, 1979. — 58 с.

36. Казанцев, А. Г. Справочник по инфекционным болезням / А. Г. Казанцев, В. С. Матковский. — М.: Медицина, 1986.-218с.

39. Капитана, Г. А. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины / Г. А. Калитина. — М., 1960. — Т. 49. — № 3. — 81 с.

41. Киселева, Н. И. Биолюминесцентный метод иммуноферментного анализа инсулина. Получение и применение иммобилизованных ферментов в научно-исследовательской промышленности и медицины / Н. И. Киселева // Тезисы доклада 3 Всес. науч.симпозиума. — 1980. — С. 96.

42. Коваленко, Я. Р. Анаэробные инфекции сельскохозяйственных животных / Я. Р. Коваленко — М.: Сельхозгиз, 1954.

45.Коляков, Я. Е. Ветеринарная иммунология / Я. Е. Коляков. — М.: Агро-промиздат, 1986. — С. 11.

46. Кост, Е. А. Справочник по клиническим и лабораторным методам[|исследова-ния / Е. А. Кост. — М., 1975.

50. Лабинская, А. С. Микробиология с техникой микробиологических исследований / А. С. Лабинская. -М.: Медицина, 1978.-С. 391.

52.Магазов, Р. Ш. Новый способ получения ботулинического анатоксина типа А /Р. Ш. Магазов//ВПБЗН. — 1983.-Вып. 31.-С. 108-111.

53.Матвеев, К. И. Вспышка ботулизма у норок / К. И. Матвеев, Т. И. Булатова, Т. И.Сергеева // Ветеринария. — 1957. — № 10. — С. 53.

54. Матвеев, К. И. Ботулизм / К. И. Матвеев. — М., 1959.-408 с.

55.Махмутов, А. Ф. Разработка и изучение эффективности полиспецифической гипериммунной сыворотки против рота-, коронавирусного гастроэнтерита и эшерихиозной диареи новорожденных поросят: дис. канд.биол.наук: 06.02.02 / Махмутов Айдар Фаритович. -Казань, 2012. — 171 с.

56.Месробяну, Л. Физиология бактерий / Л. Месробяну, Э. Пэунеску. — Бухарест: Меридиане, 1963.-808 с.

60. Михайлов, В. В. Ботулизм / В. В. Михайлов. — Л.: Медицина, 1980.-200 с.

64. Никитин, В. М. Справочник серологических реакций / В. М. Никитин. -Кишинев, 1977.-205 с.

65.Никитин, Е. Е. Замораживание и высушивание биологических препаратов / Е. Е. Никитин, И. В. Звягин. — Москва: «Колос», 1971.-342 с.

66.Никифоров, В. Н. Ботулизм / В. Н. Никифоров, В. В. Никифоров. — М.: Медицина, 1985.-198 с.

67. Никифоров, В. В. Ботулизм : учебно -методическое пособие для врачей / В. В. Никифоров, Н. А. Малышев, Б. И. Санин. — М., 2003. — 32 с.

72. Полевая, О. Ю. Хим.фармацевтический журнал / О. Ю. Полевая, И. Е. Ковалев, Т. Н. Робокидзе // 1980. -Т. 14. — №11. — С. 31.

73.Пяткин, К. Д. Микробиология / К. Д. Пяткин, Ю. С. Кривошеин. — М.: Медицина, 1981.-511 с.

74.Рыцай, Г. Бюллетень Польской АН / Г. Рыцай // 1956. — отд.2 — Т.4. -С. 335. Руководство по иммунологии — М.: Медицина, 1964.-450 с.

75.Синицин, В. А. Материалы по индикации ботулинических токсинов А и В с помощью непрямой реакции гемагглютинации в пищевых продуктах и объектах внешней среды / В. А. Синицин // Дисс. канд. — Чита, 1960.

76.Синицин, В. А. Военно-медицинский журнал / В. А. Синицин // 1961. — №10. -С. 65.

78.Тимаков, В. Д. Микробиология / В. Д. Тимаков. — М., 1973.-432 с.

79. Ургуев, К. Р. Клостридиозы животных / К. Р. Ургуев. — М., 1987.-183 с.

80.Феклисова, Л. В. Вспышка ботулизма в Московской области / Л. В. Феклисо-ва // ВПБЗН. — 1978. — Вып. 28. — С. 20 — 23.

81. Франке, 3. Химия отравляющих веществ: монография / Франке 3., Франц П., ВарнкеВ. — Издательство «Химия», т. 1 — 1973.-435 с.

85.Шувалова, Е. П. Ботулизм / Е. П. Шувалова // Инф. болезни. — М.: Медицина, 1976.-С. 101 — 107.

88.Boroff, P. A. Toxin of Clostridium botulinum / P. A. Boroff // In: Toxin Anim. and Plant Origin. New York. — 1972. — V.2. — P. 631 — 640.

96. Coleman, G. E. Some observation on the pathogenecity of B. botulinus / G. E. Coleman, K. F. Meyer // Journ. Inf. Dis. -1922. — P. 622.

98. Coons, A. H. Fluorescent antibody methods / A. H. Coons // Gen Cytochem Methods. — 1958.-P.399-422.

99. Coons, A. H. The diagnostic application of fluorescent antibodies / A. H. Coons // Schweiz Z. Pathol Bakteriol. — 1959. — P. 700 — 723.

100. Csizmas, L. Preparation of formalinised erythrocytes / L. Csizmas // Proc. soc. exp. Biol. — I960.-v. 103.-P. 157.

107. Dobbins Place, J. Immunol. Meth. / J. Dobbins Place, H. R.Schraeder // 1982. -V.48. -P.251 -255.

109. Dolman, C. E. Botulism as a World Health Problem / C. E. Dolman; In: Botulism. Proc. sumpos. Cincinnati: Ohio, 1964 -P.5 — 30.

110. Doms J. E. The imunisation of broiler chickens against type C botulisn / J. E. Doms // Avian Dis. — 1982. -26. — 2. — P. 340 — 345.

113. Eckert, H.G. Radioimmunoassay / H.G. Eckert. — Chem.Int.Ed.Engl., 1976.-525 P-

120. Haagsma, J. Antonie van Zeawerhock / J. Haagsma // 1980. — V.46. — №5. — P. 510.

122. Hatheway, C.Z. Laboratory procedures for cases of suspected infant botulism / C. Z. Hatheway // Rev. Infect. Dis. — 1979. -1. — P. 647 — 651.

125. Jonson, H.M. Bacteriologi /H.M. Jonson, K. Brenner, R. Angebotti. — J.Bact., 1966.-367 p.

126. Kadis, S. Microbial Toxins. Bacterial protein toxins / S. Kadis, T.C. Montie, S.J. Ajl. — NY:Acad. Pess., V.2. — 1971. — 413 p.

128. Kenny, G. E. Microbiol / G. E. Kenny, C.L. Dunsmoor. — J. Clin., 1983. — V.17. -P.655 — 665.

129. Keppie, J. The pathogenicity of the spores of CI. botulinum / J. Keppie // Journ. Hyg. — 1951. — P. 36-49.

137. Malvano, R. Immunoenzymatic Assay Technigues / R. Malvano // Martinus Ny-hoff Rublisher. — 1980.- P. 72.

138. Meyer, K. F. The status of botulism as a world health / K. F. Meyer // Bull. Wld Hlth Org. — 1956 — V. 15. — P. 281.

140. Mierzejewski, J. Clostridium botulinum-like bacilli / J. Mierzejewski // Polish. -1979.-33(4).-P. 495 — 500.

142. Muller, W. Ursachen Sumptome und Bekampfimd des Botulismus bei NERS / W. Muller // Dt. Pelztierzuchter. — 1983. — 57. — 5. — P. 74 -75.

146. Notermans, S. N. Tijdschr. diergeneesh / S. N. Notermans, A. H. Havalaar // 1986. — V. 1.11, №13. — P. 634 — 638.

147. Orr, P.E. The pathogenicity of B. botulinus / P.E. Orr // Journ.Inf. Dis. — 1922. -v.30. — P. 118.

151. Reiss, J. Immunologe / J. Reiss, B. Wotityla // 1981-1983. — V.l. — P. 97 — 108.

152. Rosin, H. Bornholmer Krankheit Botulismus / H. Rosin // Pharmahother Kinde-sater. München. — 1988. — P. 159 — 161.

155. Schwarzmaier, A. Botulismus bein Rind ein Fallbericht / A. Schwarzmaier, B. Schmidt, T. Volkerl // 1987. — V.42. -№7. — P. 567 — 568.

duct.Anim.Usage new and Conf.Biol.Prod.Proc.Symp. London. — 1986. — P. 141145.

157. Skurrie, I. J. /1. J. Skurrie, G. L. Gilbert // J. Clin. Microb. — 1983. — V. 17. — P. 738-741.

160. Thom, Ch. Botulism from canned asparagus / Ch. Thom, R.B. Edmondson, L.T. Gilther // Journ. Amer.Med.Ass. — 1919. — 73. — P. 907 — 919.

161. Van Weemen, B.K. Immunoassay using antigenenzyme conjugate / B. K. Van Weemen, A. H. Schuwrs // FEBS Letters. -1971. — V.15. — P. 232 — 236.

162. Voller, A. Immunoassay / A. Voller, A. Bartlett, P. Bidwett // Trans.Roy.Soc.Trop.Med and Hug. — 1976. — V.70. — P. 98.

163. Voller, A. Immunoassay for the 80-s Lancaster / A. Voller // MTR. — 1981.

165. Weinberg, M. De anatoxine botulinique / M. Weinberg, P. Goy // Compt.Rend.Soc.Biol. — 1924. — P. 269.

166. Weis, H. E. Botulismus als Ursache eines Massensferbens bei Wasservogeln / H. E. Weis // Tierarztl. Unisch. — 1982. — 37. — 12. — P. 842 — 846.

167. Wentzel, L. High toxicity of pure Botulinum type D toxin / L. Wentzel, M. Sterne, A. Poison // Nature. — 1950. — P. 739 — 740.

169. Wood, W. C. Immunoassay technology / W. C.Wood. — Berlin, 1985. — V.l.

СПИСОК ИЛЛЮСТРИРОВАННОГО МАТЕРИАЛА

Таблицы:

1. Культурально-биохимические свойства штаммов Cl. botulinum лиофилизи-рованных в 1989 году.

2. Токсигенные свойства штаммов Cl. botulinum лиофилизированных в 1989 году.

3. Культурально-биохимические свойства пассажированых штаммов С1. botulinum.

4. Токсигенные свойства пассажированных штаммов Cl. botulinum.

5. Подтверждение токсигенности надосадочной жидкости на белых мышах.

6. Схема гипериммунизации и титры антител в сыворотках крови кроликов.

7. Иммуногематологические и биохимический показатели изменений сыворотки крови после гипериммунизации.

8. Активность и специфичность антигенного эритроцитарного ботулиническо-го диагностикума.

9. Активность и специфичность антительного эритроцитарного ботулиниче-ского диагностикума.

10. Результаты исследования полиспецифического ботулинического иммуно-ферментного коньюгата.

11. Обнаружение возбудителя Cl.botulinum и его токсина в объектах ветеринарного надзора.

12. Сравнительная оценка культурально-биохимических свойств лиофилизированных штаммов Cl. botulinum и их паспортных данных

13. Сравнительная оценка культурально-биохимических свойств нативных штаммов Cl. botulinum и их паспортных данных.

14. Результаты проверки диагностических препаратов.

Ботулизм — острая пищевая интоксикация, протекающая с преимущественным поражением центральной и вегетативной нерв­ной системы ботулиническим токсином — силь­нейшим биологическим ядом, вырабатываемым палочкой ботулизма (Clostridium botulinum)и относящемся к особо опасным патогенным биологи­ческим агентам. Ботулизм может быть связан также с вегетацией возбудителя в ране или кишечнике.

Материалом для исследования являются кровь, моча, испражнения, промывные воды желудка, остатки пищи (мясные, рыбные, фруктовые, овощные, грибные консервы, колбасы и др.). Обычно у больного с подозрением на ботулизм исследуют на наличие токсина кровь, а на наличие возбудителя — испражнения.

Биопроба.Проводится реакция нейтрализации на белых мышах с целью обнаружения ботулотоксина в исследуемом материале. Обнаружение токсина палочки ботулизма и его типа имеет важное значение для назначения пациенту антитоксической противоботулинистической сыворотки — един­ственного эффективного средства специфической терапии и экстренной профи­лактики ботулизма. Реакцию ставят со смесью антитоксических противоботулинистических сывороток, а также с моновалентными сыворотками типов А, В, Е. При наличии в исследуемом материале ботулотоксинамыши контрольной группы погибают с явлениями параличей (парез конечностей, осиная талия и т.д.). При нейтрализации токсина антитоксической сывороткой мыши остаются живыми.

Экспресс-диагностика ботулизмапроводится с помощью РНГА с антительными эритроцитарными диагностикумами для обнаружения ботулотоксина в исследуемом материале.

Бактериологический метод.Исследуемый материал засе­вают в 4 флакона со средой Китта –Тароцци; один флакон прогре­вают при температуре 600 С в течение 15 мин (для селекции С. botulinum типа Е), другой — при 800 С в течение 20 мин. Накопление куль­тур клостридий ботулизма типов Е и F происходит при 28 °С, а клостридий типа А и В — при 35 °С в течение 48 ч. Для активации токсина Е к питательной среде добавляют трипсин.

Через 24 — 48 ч инкубирования учитывают характер роста посевов (помутнение и газообразование), готовят мазки в окраске по Граму. При наличии типичных бактерий в виде «теннисных ракеток» со спорами (рис.15) делают пересев на кровяной сахарный МПА, на котором С. botulinumобразует колонии неправильной формы с гладкой или шероховатой поверхностью и зоной гемолиза. В глубине столбика сахарного МПА колонии палочки ботулизма имеют вид пушинок или чечевичек.

Рис. 15. Палочка ботулизма — Clostridium botulinum. Окраска по Граму. Грамположительные спорообразующие палочки в виде «теннисной» ракетки. х900

Идентификация чистой культуры проводится на основании изучения биохимических свойств (посев в сре­ды «пестрого» ряда), изучают другие дифференциальные призна­ки (см. табл.). Антигенные свойства культуры изучают с помощью РА с типовыми сыворотками. Выявля­ют также ботулинический токсин в фильтрате бульонной культуры и его тип с помощью реакции нейтрализации на белых мышах.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *