Кровь на ПЦР туберкулез

Целесообразность проведения анализа мочи на туберкулез методом ПЦР

Свернуть

Если Манту дала плохой результат прибегают к дополнительным методам диагностики. Главное выявить заболевание, а вопрос о том, сколько диагностическое обследование стоит, отходит на задний план. К одному из самых точных и разрешенных в любом возрасте относится ПЦР. Анализ мочи на туберкулез данным способом выявляет МКБ сразу же после их попадания в организм. Что собой представляет методика и в чем ее преимущества?

Что такое анализ мочи методом ПЦР?

Полимеразная цепная реакция руководствуется принципом молекулярной биологии. Чтобы исследовать урину (или другой биоматериал) используют специальные ферменты. Они могут копировать ДНК микроорганизмов. Специалисты сравнивают материал с имеющейся базой и определяют, есть ли заражение. В случае положительного ответа выясняется степень инфицирования и тип возбудителя.

Тут важна точность, поэтому работники лаборатории должны иметь соответствующие знания и навыки.

Кроме туберкулеза с помощью ПЦР диагностируют и другие инфекционные болезни (гепатит, ИППП, ВИЧ, кандидоз, боррелиоз и др.).

Некоторые родители уверены, что такой метод можно использовать вместо Манту, но это не так. Даже его высокоэффективность не может заменить пробу, которая является утвержденной и обязательной во всех дошкольных и школьных учреждениях. Предоставления в детский сад или школу результата ПЦР может быть недостаточно для допуска ребенка в детский коллектив.

Эффективен ли данный метод при диагностике туберкулеза?

ПЦР мочи на туберкулез эффективный способ выявления патологии, но иногда бывают ложные результаты по отношению к маленьким детям. В этом случае наблюдаются неточности, так как в урине много примесей. Иногда для достоверности и подтверждения диагноза проводятся дополнительные обследования.

Насколько подходящий этот метод в конкретном случае подскажет фтизиатр. Именно у этого специалиста предварительно нужно пройти консультацию.

Противопоказания к методу

Какие-либо противопоказания отсутствуют. Делать анализ разрешено:

  • у детей;
  • при ОРЗ, ОРВИ, ГРИПпе, кори и пр.;
  • во время аллергий и др.

Нецелесообразно проводить возрастной категории от 0 до 3-ех лет из-за получения недостоверных результатов.

Данный метод обследования выбирают чаще других из-за отсутствия в нем противопоказаний и высокого процента получения достоверных результатов.

Преимущества

Практика показывает, что метод оправдывает свою стоимость. Плюсы ПЦР мочи:

  • чтобы вынести «вердикт» не нужно вводить в организм никакие препараты, так как анализ производят в пробирке в условиях лаборатории;
  • безболезненный;
  • для получения результатов не нужно ждать несколько дней, достаточно считанных часов, максимум одного дня (чего нельзя ожидать, если делать посев мочи);
  • выявляет возбудитель даже тогда, когда другие методы не принесли результата;
  • обнаружить болезнь можно на ранней стадии;
  • анализ высокочувствителен, поэтому пропустить туберкулез сложно;
  • ложные результаты наблюдаются редко (обычно вина некомпетентности медработника или неправильный сбор урины самим пациентом);
  • инфекционный агент выявляется, даже если биоматериала содержится минимальное количество.

Недостатки

Сюда относится:

  • высокая цена (но она колеблется в зависимости от курса доллара и других факторов);
  • бывают ложные результаты (около 10%).

Ложные ответы появляются по разным причинам.

  1. Если сбор урины осуществлялся неверно, были нарушены рекомендации.
  2. Когда работник лаборатории не имеет нужных знаний для проведения анализа или им была нарушена техника исследования материала.
  3. Если в собранную порцию мочи не попали микобактерии.
  4. В моче много сторонних примесей, которые искажают результат (обычно у малышей).

Все вышеперечисленное – повод использовать дополнительные диагностические мероприятия.

Подготовка к анализу

Как сдавать мочу? Чтобы урина не стала причиной неверного ответа, нужно осуществить правильный ее сбор. Немаловажна подготовка.

  1. Если анализ планируется взрослому человеку, то за 1-2 суток до него нужно забыть о половых контактах.
  2. Важно сказать врачу об антибактериальной терапии (если таковая была за последние недели). Нужно выждать не менее месяца и только потом приступать к обследованию. Любые медикаментозные препараты повлияют на результат анализа.
  3. Лучшее время для сбора – утро. Предварительно не допускается употребление пищи и каких-либо напитков.
  4. Половые органы предварительно не обмываются.
  5. Важно приобрести специальный вакуумный набор, в который будет собираться моча. Поместить ее в обычную баночку, а потом перелить не выйдет. Вследствие этого в урину попадут бактерии или вирусы из внешней среды, которые помешают получить достоверный результат. Контакта с внешней средой нужно избегать. Специальный набор состоит из стерильной баночки с крышкой, пробирки и трубки.
  6. В баночку человек опорожняет мочеиспускательный пузырь. Важно собрать первую порцию урины.
  7. После контейнер закрывается и вставляется пробирка. Она наполнится содержимым самостоятельно. Повлияет на это отрицательное давление.
  8. После наполнения пробирки контейнер и трубка утилизируются.
  9. Полученный биоматериал отвозится в лабораторию, где проведут сам анализ. Доставляется только пробирка с имеющейся в ней мочой.

Если обследуемый по каким-то причинам не в состоянии сам собрать мочу, ему придет на помощь специалист из клиники. Специально обученные люди приедут со всем необходимым и сделают все без ошибок.

Как проводится этот анализ?

Проведение ПЦР при туберкулезе проводится в несколько этапов. Рассмотрим каждый детально.

  1. Сначала молекулы ДНК делятся на компплементарные нити путем нагревания до высоких температур.
  2. Потом в полученный материал вводят праймеры. Один их тип комплементарен ДНК 1-ой цепи (ее началу), второй ДНК 2-ой (ее концу). Тут же добавляют состав из четырех типов DDNTP. Далее происходит соединение всех компонентов.
  3. Состав нагревается и в него вводится термостабильная полимераза ДНК. После исследуемые пробы охлаждаются. Все это происходит в термостатах (термальных циклерах).
  4. В конце специалист оценивает полученные результаты. Это делается с использованием специального геля при светящихся лучах ультрафиолета. Электрофореграмму, которую получают, анализируют и результат фиксируют.

Оборудование, с помощью которого проводится анализ дорогостоящее и присутствует не везде.

Расшифровка результатов

Расшифровать результат сможет только квалифицированный специалист. При этом учитывается возраст пациента. Ответ основывается на количестве имеющихся в пробе патогенных микроорганизмов.

Ответа может быть два:

  • положительный;
  • отрицательный.

Положительный значит, что в моче имеются МБК. Это повод либо пройти дополнительную диагностику (при необходимости), либо начинать лечение туберкулеза. У детей обычно бывают ложные результаты, поэтому назначают иные методы обследования, которые подтвердят диагноз.

При получении отрицательного ответа можно быть спокойным, инфицирования нет. При наличии симптоматики, которая говорит об обратном, обследование не заканчивается.

После того, как работник лаборатории расшифровал результат, бумага, на которой указывается ответ, направляется узкому специалисту, тому, кто давал направление на анализ. Фтизиатр изучает данный документ, на основе которого решает, что дальше делать.

Стоимость анализа в разных центрах

Ниже можно ознакомиться с информацией о том, какие приблизительные цены на ПЦР мочи в медицинских лабораториях. Для сравнения представляем три популярных учреждения.

Наименование медицинского центра Адрес Стоимость анализа
Инвитро г. Москва, Алексеевский, Кулаков переулок, 13 365 рублей
Медлайн-сервис г. Москва, Пятницкое шоссе, д. 41 390 рублей
Центр Роса г. Москва, улица Гвоздева, д. 5 564 рубля

Из вышеописанного можно сделать вывод, что стоимость на анализ не превышает 400 рублей. Такая сумма не может остановить больного при необходимости подтверждения диагноза.

Имейте в виду! Иногда в клиниках присутствуют акции и скидки. Следить за ними можно на сайтах лабораторий, узнать в телефонном режиме или не ресепшене в самом офисе.

Вывод

Анализ мочи на ПЦР – методика, которую можно применять всем без исключения. Она не рекомендована малышам, так как результат может быть ложным. Важно правильно подготовиться к анализу и собрать материал. Сбор осуществляется в домашних условиях самостоятельно, допускается помощь специалиста и забор в условиях клиники (при необходимости). Нельзя помещать урину в контейнеры, непредназначенные для анализа. Тут приобретается специальный набор. Проводят саму диагностику квалифицированные работники лаборатории, придерживаясь всех правил. Без наличия дорогостоящего оборудования исследовать урину на ПЦР будет невозможно.

Методика эффективна и способна выявить туберкулез даже тогда, когда количество микобактерий в организме минимально. Но, несмотря на это пробу Манту им заменить нельзя. Подобным способом целесообразно подтверждать диагноз или контролировать, нет ли рецидива.

Практика показывает, что метод оправдывает свою стоимость. Плюсы ПЦР мочи:

Особенность анализа

При проникновении палочки Коха в организм человека, существует вероятность, что она негативно скажется на работе мочеполовой системы. В такой ситуации бактерия будет проявляться во время исследования урины. Учитывая высокую информативность исследования, он был принят за основу, при необходимости проведения бактериоскопии.

Но при всем этом врачи обращают внимание на то, что только выполненный анализ мочи на ПЦР (туберкулез) не позволяет однозначно подтвердить первичный диагноз. Даже если был получен отрицательный результат, это не говорит о том, что инфекция в организме пациента отсутствует.

Анализ мочи проводится при диагностировании туберкулеза. Источник: mirmam.pro

Если ранее пациент тесно контактировал с носителем, то у него будут выражены симптомы интоксикации, но предварительно должны быть исключены иные патологии. Также необходимо будет определить, имеются ли первичные очаги туберкулеза. Для комплексного обследования необходимо сдать на анализ не только мочу, но и мокроту, а также кровь и выполнить рентген.

При туберкулезе анализ мочи помогает подтвердить или опровергнуть первичный диагноз, а также принять решение о необходимости проведения дополнительного обследования. Сама по себе патогенная палочка устойчива к кислой среде, и может в ней сохраняться длительное время. В ходе исследования лаборанты используют специальные реактивы, которые окрашивают микроорганизмы, не способные выживать в таких условиях.

Изначально выполняют окрашивание при помощи карболового фуксина. Далее происходит обесцвечивание веществ, которые не устойчивы к кислоте, а затем их обрабатывают метиленовым раствором. Итогом таких манипуляций становится то, что все нормальные элементы приобретают синий цвет, а бактерии туберкулеза остаются малиновыми.

Подготовка

Если пациенту был назначен анализ на туберкулез по моче, тогда обязательно необходимо правильно к нему подготовиться. Если не следовать некоторым правилам, то с высокой долей вероятности результат исследования будет не верным, поскольку нельзя недооценивать воздействие внешних факторов.

В первую очередь, все врачи говорят, что из рациона необходимо исключить различные фрукты и овощи, которые могут искажать цвет биологического материала. К таким продуктам можно отнести красную свеклу и блюда из нее, морковь, чернику, ежевику и спаржу. Также следует избегать приема таких лекарственных препаратов как ацетилсалициловая кислота, витамин B6, Фурагин и прочие диуретики.

Перед исследованием нужно прекратить прием лекарственных препаратов. Источник: lor-orvi.ru

До того момента как будет прекращен прием медикаментов, следует рассказать о том, что принимает пациент, ведущему специалисту. Что касается представительниц слабого пола, то им запрещено выполнять сбор биологического материала во время менструальных кровотечений, поскольку так в урину могут попасть нежелательные выделения.

Обязательно, прежде чем будет взята моча, следует выполнить гигиену половых органов, вне зависимости от того, назначен анализ взрослому человеку или ребенку. Во время процедур не стоит пользоваться мылом, достаточно будет подмыться теплой водой.

Для исследования подходит только утренняя порция мочи, которая выделяется сразу, после ночного сна. Важно использовать среднюю часть, поэтому первые пар секунд испражняться нужно в туалет. Лучше использовать специальный пластиковый стаканчик для мочи, который продается в каждой аптеке. Такая емкость стерильная и больше всего подходит для сбора биоматериала.

Расшифровка

После того как было проведено исследование мочи на определение у пациента туберкулеза, результаты нельзя воспринимать как однозначно точные, вне зависимости от того, положительные они или отрицательные. Чтобы врач мог выставить корректный диагноз, пациенту еще придется пройти ряд обследований.

В случае получения положительного результата, специалисты с высокой долей вероятности могут предполагать, что в органах мочевыводящей или половой системы присутствует патогенная бактерия. При таких условиях, во время дообследования, должно быть выявлено очаговое поражение почек.

Если результат отрицательный, это говорит лишь о том, что в фильтрационном органе бактерия отсутствует. Однако также необходимо пройти комплексное медицинское обследование, чтобы определить, возможно, она имеется в других системах организма. Категорически не допускается самостоятельно интерпретировать результат, а также проводить бесконтрольное лечение.

Показанием к проведению анализа мочи на туберкулез является подозрение на наличие патологии. Нередко подобная диагностика требуется людям, которым нельзя делать пробу Манту или туберкулиновый тест из-за наличия противопоказаний. Чтобы исследование полимеразной цепной реакции дало правильные результаты, важно подготовиться к сдаче биологической жидкости.

Подготовка к анализам

ПЦР мочи на туберкулез может применяться вместо Манту у детей и взрослых для уточнения диагноза. Важно сдать первую утреннюю порцию урины, полученную до приема пищи, употребления жидкостей. Как и на общий анализ мочи, на бактериоскопию требуется средняя порция (около 50-100 мл). Предварительно важно за 1-2 суток ограничить употребление в пищу моркови, свеклы, черники и прочих красящих продуктов, которые могут придавать моче нехарактерный для нее цвет. Кроме того, запрещено употребление алкогольных напитков, вступление в половое сношение.

Женщинам необходимо дождаться окончания менструации.

Предварительно следует тщательно промыть половые органы. Кроме того, женщинам при обильных выделениях рекомендуется вставлять во влагалище тампон: это поможет избежать искажения результатов. Емкость для сбора биологической жидкости должна быть чистой. Рекомендуется приобрести специальные стерильные пластиковые контейнеры в аптеке.

Трогать емкость руками изнутри не следует (так можно занести в нее бактерии, из-за которых результаты исследования будут искажены), после сбора мочи сразу закрыть крышкой.

Рекомендуется начать испражняться в унитаз, после чего подставить контейнер, собрать требуемое количество жидкости. Завершать мочеиспускание следует тоже в унитаз. Моча должна быть доставлена в лабораторию не позже, чем через 2 часа после сбора; в противном случае могут начаться реакции, из-за которых исследование будет неточным.

Суть и техника проведения анализа

Если Манту ребенку или взрослому проводить запрещается, в качестве диагностического метода используется ПЦР на туберкулез, анализ крови, флюорография. Анализ мочи на микобактерии туберкулеза помогает обнаружить возбудителей патологического процесса при их наличии, требуется для подтверждения или опровержения диагноза. Обнаружить палочку Коха возможно несколькими способами: бактериоскопическим, бактериологическим и посредством биологической пробы. Каждая из методик имеет преимущества и недостатки; выбор осуществлять должен специалист.

Поскольку бактерии погибают в среде с высокой кислотностью, для их обнаружения берутся реактивы, окрашивающие неустойчивые структуры. Первым делом для обесцвечивания применяется серная кислота. После используют раствор метиленового синего. Все структуры синеют; исключение составляют лишь приобретающие малиновый оттенок патогенные микроорганизмы.

Туберкулез — не приговор! Наша постоянная читательница порекомендовала действенный метод! Новое открытие! Ученые выявили лучшее средство, которое моментально избавит вас от туберкулеза. 5 лет исследований. Самостоятельное лечение в домашних условиях! Тщательно ознакомившись с ним, мы решили предложить его и вашему вниманию. Читать далее >>

Недостатками подобной методики являются затруднения с очищением мочи от посторонних примесей, которые могут становиться причиной искажения данных. Исследование покажет более точные результаты, если урина будет взята с использованием катетера.

Такой способ диагностики туберкулеза представляет собой культивацию на питательной среде выпавшего осадка. Минусом методики является высокая длительность ожидания результатов. Сроки могут варьироваться в зависимости от выбранной среды: при выборе кровяной ожидание составляет примерно 1 неделю, для картофельной увеличивается до 1-1,5 месяцев.

С помощью данного анализа можно выяснить, имеется ли в организме инфекционно-воспалительный процесс. Не всегда однако он показывает наличие палочек Коха при туберкулеза легких, ПЖ и других внутренних органов. По этой причине исследование дополняют другими. Анализ по Нечипоренко позволяет установить общую численность эритроцитов, лейкоцитов и белковых клеток в сданном образце биологической жидкости.

Считается самым достоверным методом. Осадок из мочи вводится в брюшную полость или подкожно животному (чаще крысе либо морской свинке). Затем за грызуном наблюдают на протяжении 1 месяца. Если человек болен, животное также будет заражено, вскоре погибнет. При этом будут наблюдаться очаги инфекции. Выяснить, заразилось ли животное, можно и раньше, сделав ему анализ крови или пункцию из лимфатических узлов. Такой способ применяется нечасто, поскольку часто у лаборатории отсутствует возможность к его проведению.

Эффективность методов

Биологическая проба позволяет определить наличие палочек Коха в урине в 100% случаев.

Общий анализ мочи при туберкулезе не считают информативной методикой, поскольку изменения наблюдаются лишь у 60% больных. Чаще всего таким способом удается обнаружить туберкулез почек. Не слишком информативен и анализ по Нечипоренко: он не позволяет выявить, какие бактерии присутствуют в урине, указывает лишь на наличие воспаления, которое не всегда бывает вызвано туберкулезом.

Бактериоскопическое исследование более информативно, позволяет установить наличие возбудителей в детском или взрослом организме с вероятностью до 80%.

Посев мочи на туберкулез обладает большей информативностью. Из-за слишком долгого ожидания его часто заменяют на ПЦР мочи: эта методика позволяет установить наличие микобактерий даже при отсутствии почечных изменений, при поражениях легких.

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

Суть метода

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

  • Кровь.
  • Слюна.
  • Мокрота.
  • Выделения из половых органов.
  • Смывная жидкость бронхов.
  • Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

  1. Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
  2. Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
  3. Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-исследование туберкулеза

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

Показания для проведения ПЦР-исследования туберкулеза

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

  • Длительный контакт с больным туберкулезом.
  • Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
  • Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
  • Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
  • ВИЧ-инфекция.
  • Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
  • Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

  • Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
  • Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
  • Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
  • Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
  • Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
  • Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Требования к ПЦР-лаборатории

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

  • Зона приемки и сортировки проб.
  • Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
  • Зона проведения реакционных проб.
  • Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

Плюсы ПЦР-диагностики

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

  • Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
  • Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
  • ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
  • С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
  • Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
  • Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
  • Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
  • ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
  • Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы ПЦР-диагностики

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

  • Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
  • Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
  • При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
  • Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
  • Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

Где пройти ПЦР-исследование на туберкулез

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

Микобактерия туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis), обнаружение ДНК

Общая информация

Анализ используется для выявления возбудителя туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis). В ходе исследования в образце биоматериала пациента посредством метода полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (РТ-ПЦР) происходит обнаружение генетического материала (ДНК) микобактерии.

Туберкулез – это инфекционное заболевание, обнаруживающееся у человека и животных и передающееся преимущественно воздушно-капельным путем. Вероятность заражения данной инфекцией выше у лиц с нарушением работы иммунитета, ассоциированным со СПИДом, ВИЧ-инфекцией, а также у пациентов, которые страдают сахарным диабетом, нарушением работы почек, перенесли трансплантацию органов, проходят курс лечения иммуносупрессорами, а также у женщин на этапе гестации и лиц пожилого возраста. Заражению микобактерией туберкулеза подвержены лица, вступающие в контакт с больными туберкулезом, дети младше 5 лет после виража туберкулиновой пробы. Самыми уязвимыми группами населения в отношении туберкулеза считаются бездомные, заключенные и наркозависимые.

Для обнаружения Mycobacterium tuberculosis применяются специальные тест-системы, основанные на обнаружении геномной ДНК возбудителя посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (реал-тайм ПЦР). В современной диагностике данный тест считается одним из самых быстрых и высокочувствительных методов.

Стандартные методы обнаружения Mycobacterium tuberculosis основаны на выращивании патогенных микроорганизмов в питательной среде. Основным недостатком таких исследований считается низкая скоростью роста колоний Mycobacterium tuberculosis, так как получения результатов необходимо ожидать после получения биоматериала пациента больше одного месяца.

Молекулярно-биологические методы характеризуются высокой чувствительностью и специфичностью они основаны на обнаружении генетического материала микобактерий туберкулеза. Основным достоинством данного метода является высокая скорость получения результата. Применение ПЦР реал-тайм позволяет обнаружить возбудителя туберкулеза в биоматериале пациента даже в день его получения.

Бактериемия, проникновение в кровь пациента микобактерий, может возникать на ранних стадиях туберкулезной инфекции, а также в случае развития генерализованного или внелегочного туберкулеза. Такое патологическое состояние опасно тем, что иммунный ответ на бактерии может стать причиной развития сепсиса и септического шока, которые могут являться причиной возникновения летального исхода. Вероятность развития генерализованного туберкулеза наиболее высок у ВИЧ инфицированных лиц на поздних стадиях заболевания, а также у тех, кто отказался от противотуберкулезного лечения и не обратившихся своевременно за медицинской помощью при возникновении симптомов туберкулеза.

Диагностирование туберкулезной инфекции у ВИЧ-инфицированных лиц затруднено из-за иммуносупрессированного состояния организма, что может проявляться получением ложноотрицательных результатах туберкулиновых реакций и микробиологических тестов. В связи с этим исследование на Mycobacterium tuberculosis методом ПЦР реал-тайм имеет важное диагностическое значение.

Показания

Исследование применяется для диагностирования туберкулеза легких и контроля за качеством его лечения.

Тест назначается:

при подозрении на наличие у пациента внелегочной формы туберкулеза;

при возникновении у пациента симптомов бактериемии на фоне туберкулезной инфекции, таких как повышение температуры тела, усиленная потливость в ночное время;

при длительном контакте пациента с больным туберкулезом;

при ненормальной реакции на туберкулиновую пробу у детей;

при наличии у пациента ВИЧ-инфекции.

Полученные результаты

Референсные значения: отрицательно.

Предполагаемые болезни

Положительный результат теста может указывать наличие возбудителя в исследуемом биологическом материале пациента, что характерно для активной формы туберкулеза, требующей лечения. Обнаружение большого количества микобактерий чаще всего указывает на внелегочную форму туберкулеза либо генерализацию инфекции.

Отрицательный результат указывает на отсутствие заражения пациента Mycobacterium tuberculosis.

Врач-консультант

Данное исследование может быть назначено терапевтом, врачом общей практики, пульмонологом или педиатром.

ПЦР диагностика туберкулеза у детей и взрослых

Современные методы диагностики (пцр, диаскинтест, квантифероновый тест) обладают высокой эффективностью, но на практике исследования не проверены. Туберкулинодиагностика была основой для выявления инфицированных и больных людей.

Способ позволил выявить много больных людей, снизить статистику заболеваемости, смертности.

Посев на микобактерии и микроскопия мокроты по Цилю-Нельсону позволяет достоверно диагностировать инфекцию. Проблема вызывает точное взятие мокроты прямо из пораженного бронха. На фоне туберкулезного процесса поражается значительная часть бронхиального дерева. После бактериального посева возможно проведение пробы на чувствительность возбудителя к антибиотику.

После анализа результатом диагностики фтизиатрам стало ясно, что отсутствие выделения палочки Коха не означает отсутствие инфицирования организма. Возбудитель может определяться после второго, третьего, четвертого взятия материала.

Современные диагностические методы (дст, Квантифероновый тест) выявляют микобактерии при активном течении заболевания. При наличии микобактерий внутри лимфатических узлов, при внелегочных формах заболевания тесты чаще всего отрицательны.

Своевременная диагностика составляет основу предотвращение серьезных осложнений и опасных последствий заболевания.

Современные методы

Заменой классической туберкулинодиагностике является диаскинтест (дст). Согласно последним постановлениям исследование должно заменить стандартную пробу Манту, которая позволила выявить много случаев заболеваемости, инфицированности среди населения.

Суть диаскинтеста, как и туберкулинодиагностики, предполагает подкожное введение белков возбудителей туберкулеза. В ответ на инъекцию вырабатывается реакция гиперчувствительности со специфическими кожными изменениями: покраснение, уплотнение, образование пузырей.

Положительный результат диаскинтеста характерен для пациентов с активным течением заболевания. При инфицировании или повышенной аллергизации исследование будет отрицательным. Отрицательный эффект дст может быть результатом сильного иммунитета, но при инфицировании человека.

При сравнении с Манту диаскинтест является более универсальным и чувствительным способом диагностики туберкулеза. Отсутствие выявления инфицированности требует его применения одновременно с туберкулинодиагностикой.

Несмотря на результаты клинических испытаний дст, ученые утверждают об общей универсальности и чувствительности способа, нельзя считать исследование универсальным диагностическим решением.

Разработан тест академиками НИИ Сеченова. Отсутствие аллергии при использовании диаскинтеста объясняется подкожным введением видоспецифичных туберкулезных белков. После их введения определяется кожная реакция в виде покраснения, уплотнений.

Что такое квантифероновый тест

Квантифероновый тест оценивается после взятия крови больного. Механизм действия процедуры заключается в определении гамма-интерферона, который высвобождается Т-лимфоцитами после встречи с микобактериями туберкулеза. Тесты определяют туберкулезные белки, которые содержат не только бактерии человечьего и бычьего типов. Квантифероновый тест можно использовать также для диагностики микобактериозов, провоцируемых другими микобактериями, которые формируют специфические изменения на рентгенограмме. Результат теста определяется в нескольких пробирках, что повышает диагностическую чувствительность метода.

ПЦР для диагностики детского туберкулеза

Полимеразная цепная реакция – точный, но дорогостоящий метод диагностики туберкулеза. ПЦР проводится после бронхоскопии.

Рационально проведение полимеразной цепной реакции после получения отрицательных результатов. Результаты оцениваются после трехкратного посева мокроты на микобактерии туберкулеза. При самых благоприятных условиях выявление возбудителя свидетельствует об инфицированности. Назначение химиопрофилактики позволяет избежать активного туберкулезного процесса при наличии палочки Коха.

При получении штамма микроорганизма возможен посев на антибиотикочувствительность. Определение антибиотиков, способных уничтожать микроорганизмы, позволяет оценить, какими препаратами проводить лечение инфекции.

ПЦР у детей проводится при отрицательных результатах посева, но при наличии виража туберкулиновой пробы, визуализации рентгенологических признаков инфицирования, выявлении клинических симптомов текущей инфекции.

Полимеразная цепная реакция обеспечивает высокую точность (около 99%). Метод основан на амплификации нуклеиновых кислот. У микобактерий, вирусов и других микроорганизмов существуют уникальные последовательности нуклеотидов. Их диагностика позволяет выявить возбудителя заболевания.

Чувствительность пцр у детей менее низка, чем у взрослых. На практике выявлены следующие особенности полимеразной цепной реакции у ребенка:

  1. Специфичность – 80-100%;
  2. Чувствительность – 25-80%.

Несмотря на высокую достоверность метода, получение отрицательного результата не означает отсутствие туберкулеза у детей. Более рационально использование способа у пациентов с иммунодефицитными состояниями. При диагностике внелегочных форм туберкулезной инфекции.

Ошибки при интерпретации определяется нарушениями при заборе и подготовке материала для исследования.

Причины отрицательного результата пцр при диагностике туберкулеза

Распространение микобактерий по организму лимфогенным (по лимфатическим сосудам) и гематогенным (по кровеносному руслу) путем обеспечивает заселение многих тканей, появление внелегочных очагов инфекции.

При рентгенологическом определении очагов распада (деструкции) в легких нет необходимости проведения пцр. У взрослых с использованием рентгенографии можно выявить запущенные формы с высокой степенью достоверности.

У детей пцр исследование применяется чаще вследствие скрытой локализации микобактерий внутри лимфоузлов, что приводит к получению отрицательных результатов при применении других способов диагностики. При бактериальном посеве достаточно выявления около 10 микроорганизмов. Нужно учитывать, что не все отвечают за активный туберкулез легких.

Для правильной диагностики пцр, бактериального посева, дст следует соблюдать требования:

  1. Хранить материал в стерильных пробирках;
  2. Исключать попадание других бактерий;
  3. При транспортировке соблюдать личную гигиену для предотвращения попадания биоматериала на тело, лицо, в дыхательные пути.

Храниться кровь вместе с консервантом ЭДТА. Существуют уникальные особенности приготовления материала для каждого лабораторного анализа, с которыми знакомы специалисты.

Инновационные методы диагностики

Раннее определение инфекции позволяет провести своевременную химиопрофилактику, предотвратить тяжелое течение заболевания.

Стертость клиники в детском возрасте, недостаточные результаты анализов, неграмотная интерпретация при оценке проб не позволяет своевременно верифицировать инфекцию. Для предотвращения детской заболеваемости требуется тщательный анализ результатов с возможностью установки диагноза на раннем этапе.

Современный способ лабораторной диагностики туберкулеза у детей – выявление TAB-TM

Реакция на определение Т-клеточного маркера у детей под названием «TAB-TM» характеризуется высокой чувствительностью. Суть метода заключается в выявлении особого кластера дифференцировки (CD-27), локализованного на поверхности Т-лимфоцитов. После выделения этого фактора проводится окрашивание цитокинов с цитометрией.

Метод в литературе стал описываться с 2014 года. Результаты наблюдений свидетельствуют о высокой чувствительности метода. Определение TAB-TM является экспресс методом диагностики туберкулеза путем исследования мокроты.

Анализ крови на туберкулез – что показывает

На начальном этапе туберкулезная инфекция протекает без специфической клинической симптоматики. Лабораторная диагностика у детей становится возможной тогда, когда палочка Коха размножается.

Какие клетки оцениваются при туберкулезном процессе в лабораторном анализе крови:

  1. Эритроциты – красные клетки крови, отвечающие за перенос кислорода к тканям. При легком течении легочного туберкулеза со стороны красного ростка крови патологических изменений не прослеживается. Наличие деструктивного очага способствует кровотечению с анемией крови. Состояние развивается при туберкулезном воспалении стенки кишечника. Количество ретикулоцитов на фоне патологии увеличивается больше 1%;
  2. Лейкоциты увеличиваются при любой инфекции. Лейкоцитоз сопровождается сдвигом лейкограммы влево. Повышение числа сегментоядерных нейтрофилов прослеживается на начальной стадии. При тяжелом туберкулезе с гнойным расплавлением, иммунодефицитных состояниях наблюдается лейкопения (снижение числа лейкоцитов крови). Одновременно повышается содержание лимфоцитов (свыше 20%);
  3. Эозинофилия может прослеживаться на начальной стадии. Состояние возникает при туберкулезных инфильтратах разных органов. Тяжелое течение туберкулеза с распадом у взрослых приводит к полному отсутствию эозинофилов;
  4. Повышение базофилов.

Лабораторный анализ на туберкулез не является специфичным ни для детей, ни для взрослых. Подобные изменения характерны для многих бактериальных или вирусных инфекций.

Показатели гемограммы предоставляют интерес для фтизиатров для определения стадии туберкулезного инфицирования.

При активной инфильтрации прослеживается лейкоцитоз вследствие увеличения количества нейтрофилов. В клетках появляется патологическая зернистость, что свидетельствует об интоксикации крови.

Очаги распада приводят к уменьшению числа эозинофилов, нейтрофилов, молодых форм, лимфоцитов. При диссеминации возникает абсолютный моноцитоз. На фоне рассасывания увеличивается число лимфоцитов и эозинофилов.

При уплотнении очагов гемограмма не характеризуется изменениями.

Анализы у детей на туберкулез: туберкулинодиагностика

Длительное время фтизиатры ставили реакцию Манту. Такие анализы на туберкулез позволяли выявлять не только активную инфекцию, но и инфицирование. Суть пробы заключалась в подкожном введении туберкулина – вещества, которое обуславливало аллергизацию организма. Для теста применялся материал, получаемый из Micobacterium Bovis. После подкожной инъекции получается папула, которая отражает реакцию организма на проникновения микобактерии:

  1. Нормальная папула – размер от 5 до 16 мм;
  2. При отсутствии реакции – ослабление иммунитета, отсутствие микобактерии;
  3. Большая папула – наличие антигенов бактерии, контактирование с носителем туберкулезной палочки.

Метод не считается надежным из-за большого количества ложноположительных реакций. При сомнительных результатах требовалось подтверждение пцр. С появлением диаскинтеста (дст) ситуация изменилась. Сочетанное использование способов позволяет получить более достоверные результаты.

Классические «фтизиатрические» способы диагностики туберкулеза

Фтизиатры для диагностики туберкулеза у детей и взрослых используют следующие анализы:

  • Изучение анамнеза пациента (контакт с больным или носителем туберкулезной палочки). Определение социальных факторов риска помогает предположить возможное инфицирование;
  • Оценка туберкулиновой чувствительности (проба Манту) с PPD туберкулином в дозе 5-10 ТE. Оценка результата проводится через 48-72 часа;
  • Рентгенологическое исследование проводится у детей и взрослых при подозрении на туберкулез, вираже туберкулиновых проб;
  • Бактериологический посев является неопровержимым доказательством инфекции, спровоцированной микобактерий туберкулеза. При правильном сборе мокроты, обнаружении возбудителя в промывных водах желудка анализы на туберкулез можно считать положительными. Палочка Коха обнаруживается в гнойных абсцессах, лимфатических узлах, асцитическом выпоте, плевральном экссудате, моче, цереброспинальной жидкости;
  • Скорость оседания эритроцитов увеличивается при любой инфекции, в том числе туберкулезе;
  • ПЦР позволяет выявить специфического возбудителя, но исследование дорогостоящее;
  • Диаскинтест определяет легочный туберкулез, но часто дает отрицательные результаты при внелегочной локализации инфекции.

Современная диагностика туберкулеза при применении комплекса методов позволяет с высокой степенью достоверности определить микобактерию в организме. С помощью существующих способов выявляется активный процесс или инфицирование. Нужно лишь вовремя обратиться к специалистам!

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *